可在不同的液体中,包括血清或唾液等复杂的液体中,对抗体-抗原相互作用和进行动态测量。
SPR用于抗体的表征
SPR是一个敏感的平台,可以确定抗体或片段与抗原的相互作用,并直接测量相互作用的亲和力和动力学。SPR仪器还可以直接测量脂质体和活细胞等相关目标分子,并且反应其自然状态下的相互作用。可以在不同的液体中进行其相互作用测量,包括100%的血清,血浆或细胞生长介质等。SPR提供了抗体的构象和方向的一些信息。
选择SPR用于抗体的表征的优势
1. 免标记的亲和力和动力学测试
2. 低成本
3. 抗体构象变化
4. 天然样品(100%血清)
5. 生物制药,甚至来自于细胞介质的药
6. 简单地准备表面传感器
SPR可以回答的关于抗体的关键问题
1. 抗体与抗原的亲和力和结合动力学参数
2. 用于免疫分析的最佳抗体是什么?
3. 在脂质环境中与受体结合最佳的抗体是什么?
4. 在活细胞中哪个细胞信号是由抗体激活的?
5. 分子X与Y的结合和离解动力学有多快?
6. 哪一种单克隆抗体具有最高的亲和力?
用SPR测量的抗体和抗原相互作用
蛋白质-抗体相互作用是制药工业和蛋白质研究领域的重要研究领域。基于抗体的生物技术药物已被证明是治疗几种顽固性疾病的有效方法。SPR是决定分子相互作用的灵敏工具。实时和标签自由测量不仅提供了有关亲和力的信息,还提供了研究系统动力学的信息。各种固定的固定协议可以用来在传感器表面上黏合分子,因此方法适用于广泛的分子。人类血清白蛋白(HSA)被固定在羧甲基葡聚糖(CMD)传感器表面,与胺偶联化学反应。测定了人类血清白蛋白抗体(抗HSA)与固定HSA的相互作用。通过对四种不同的抗hsa浓度的相互作用,计算了该结合的亲和力和动力学。正如预期的抗HhasHSA紧密结合,复杂的离解率非常慢。
结合动力学的抗体
pkc(蛋白激酶c)与癌症、II型糖尿病和阿尔茨海默氏病有关。因此,pkc的抑制剂和激活剂有望用于研究和药物开发。Llama单链抗体(VHHs)是一种新的单克隆抗体,可以特别激活或抑制人类的pkc。在标准的金传感器上,羧甲基化的葡聚糖水凝胶是自合成的。用SPR测量了动力学,并对SPR进行了跟踪分析。测量以固定角度模式进行。在此过程中,采用了一阶或二阶阶的朗缪尔绑定模型,并确定了关联和解离常数。用SPR测定的pkc激酶的活化和抑制动力学与体内的pkca HeLa细胞的转位有良好的相关性。结果表明,将VHHs与pkc构象结合,因此在SPR测量中,蛋白质定位的作用是重要的。